Služby mikroinjekce

služba mikroinjekce (MIJ) se skládá ze zařízení, přístrojového vybavení a technických znalostí nezbytných k provedení mikroinjekce, což je zásadní krok v procesu vytváření geneticky modifikovaného myšího modelu. Personál MIJ provádí každodenní činnost řízení kolonií myší, superovulace, sklizeň embryí, pronukleární, cytoplazmatická a blastocystová injekce a operace přenosu embryí. Nabídka služeb zahrnuje mikroinjekci CRISPR činidel nebo konstrukt DNA, včetně BAC (bakteriální umělý chromozom), do zygoty mnoha inbredních a speciálních kmenů myší. Nabízíme také injekci ES buněk do blastocysty i 8-buněčných embryí konvenčních myších kmenů a barevné schéma srsti se používá, kdykoli je to možné, k usnadnění hodnocení chimerismu. Služby MIJ byly také velmi úspěšné při vytváření vyřazovacích zvířecích modelů pomocí technologií ZFN (nukleáza zinkového prstu) a TALEN (aktivátor transkripce jako Efektorová nukleáza) přímo na inbredních a speciálních kmenech. Služba mikroinjekce má v současné době 5 kompletních mikroinjekčních stanic a 3 kompletní chirurgické stanice. Klíčové vybavení zahrnuje: 3 anesteziologické stroje VetEquip, 3 laserové systémy XYClone, 14 stereomikroskopů, 6 inkubátorů, 2 stahováky Mikropipet Sutter a 2 Kopf, 2 Piezo vrtačky a 3 mikroforgy.

Výroba Modelů Myší:

  • Knockout stejně jako knockin myší modely se vyrábějí vstřikováním CRISPR činidel do zygot (0,5 dpc) požadovaného hostitelského kmene. Tato embrya se vyvíjejí do termínu po chirurgickém přenosu na pseudopregnantní samici myši příjemce CByB6F1/J. Vodicí RNA rozpoznává genomické lokusy párováním bází a nukleáza Cas9 generuje v genomu dvouvláknový zlom (DSB). Pokud není použita žádná dárcovská DNA, je DSB opravena mechanismem náchylným k chybám nehomologního spojování konců (NHEJ), který často nese mutaci frameshift. Pokud je však poskytnuta a použita dárcovská DNA, homologicky zaměřená Oprava (HDR) zprostředkuje začlenění bodové mutace, vložení značky nebo loxp místa nebo výměnu myšího genu s jeho lidským orthologem.
  • transgenní myši jsou produkovány mikroinjekcí čištěného genového konstruktu do pronukleu zygotů (0,5 dpc) požadovaného hostitelského kmene. Tato embrya se vyvíjejí do termínu po chirurgickém přenosu na pseudopregnantní samici myši příjemce CByB6F1/J. Výsledná mláďata jsou předána vyšetřovateli k identifikaci transgenových nosičů. Tyto“ zakladatelské “ myši jsou poté vyšetřovatelem chovány pro analýzu exprese.
  • cílené mutantní myši jsou produkovány mikroinjekcí geneticky modifikovaných embryonálních kmenových (ES) buněk do myších embryí blastocystového stadia (3.5 dpc). Po chirurgickém přenosu a vývoji do termínu jsou chiméry (odvozené jak z hostitelského embrya, tak z zavedených buněk)identifikovány barvou srsti a vyšlechtěny vyšetřovatelem pro přenos zárodečné linie manipulované linie buněk ES.

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.