Mikroinjektionstjenester

Mikroinjektionstjenesten (MIJ) består af de faciliteter, instrumentering og teknisk ekspertise, der er nødvendig for at udføre mikroinjektion, et vigtigt skridt i processen med at skabe en genetisk modificeret musemodel. MIJ-personalet udfører den daglige aktivitet inden for styring af musekolonier, superovulation, embryohøst, pronuklear, cytoplasmatisk og blastocystinjektion og embryooverførselskirurgi. Servicetilbud inkluderer mikroinjektion af CRISPR-reagenser eller en DNA-konstruktion, herunder BAC (bakterielt kunstigt kromosom), ind i mange indavlede og specialstammer af mus. Vi tilbyder også ES-celleinjektion i både blastocyst-og 8-celletrinsembryoner af konventionelle musestammer, og pelsfarveskema bruges, når det er muligt for at lette vurderingen af kimærisme. MIJ-tjenesterne har også været meget succesrige med at skabe knockout – dyremodeller ved hjælp af teknologier direkte på indavlede og specialstammer. Mikroinjektionstjenesten har i øjeblikket 5 komplette mikroinjektionsstationer og 3 komplette kirurgiske stationer. Det vigtigste udstyr omfatter: 3 vetekruste anæstesimaskiner, 3 lasersystemer, 14 stereomikroskoper, 6 inkubatorer til benchtop, 2 Sutter og 2 Kopf mikropipettrækkere, 2 boremaskiner og 3 mikroforger.

Musemodelproduktion:

  • Knockout såvel som knockin-musemodeller fremstilles ved at injicere CRISPR-reagenser i gygoterne (0,5 dpc) af den ønskede værtsstamme. Disse embryoner udvikler sig til sigt efter kirurgisk overførsel til en modtager CByB6F1/J pseudopregnant hunmus. Guide-RNA ‘ et genkender det genomiske locus ved baseparring, og Cas9-nukleasen genererer en dobbeltstrengsbrud (DSB) i genomet. Hvis der ikke anvendes donor-DNA, repareres DSB ved den fejlbehæftede mekanisme for ikke-homolog slutforbindelse (NHEJ), som ofte bærer en frameshift-mutation. Men når donor-DNA leveres og anvendes, homology directed repair (HDR) vil formidle inkorporering af en punktmutation, indsættelse af et tag eller et loksp-sted eller bytte af det murine gen med dets humane ortolog.
  • transgene mus fremstilles ved mikroinjektion af en oprenset genkonstruktion i pronucleus af gygoter (0,5 dpc) af den ønskede værtsstamme. Disse embryoner udvikler sig til sigt efter kirurgisk overførsel til en modtager CByB6F1/J pseudopregnant hunmus. De resulterende hvalpe overføres til efterforskeren til identifikation af transgenbærere. Disse” grundlægger ” mus opdrættes derefter af efterforskeren til ekspressionsanalyse.
  • målrettede mutante mus produceres ved mikroinjektion af genetisk modificerede embryonale stamceller i blastocyst-Stadium musembryoner (3,5 dpc). Efter kirurgisk overførsel og udvikling til sigt identificeres kimærer (afledt af både værtsembryoet og de introducerede celler) ved pelsfarve og opdrættes af efterforskeren til kimlinjetransmission af den manipulerede ES-cellelinie.

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.