Servicios de Microinyección

El Servicio de Microinyección (MIJ) está compuesto por las instalaciones, la instrumentación y la experiencia técnica necesarias para llevar a cabo la microinyección, un paso esencial en el proceso para crear un modelo de ratón modificado genéticamente. El personal del MIJ lleva a cabo la actividad diaria de manejo de colonias de ratones, superovulación, cosecha de embriones, inyección pronuclear, citoplasmática y blastocisto y cirugía de transferencia de embriones. Las ofertas de servicios incluyen microinyección de reactivos CRISPR o una construcción de ADN, incluido el BAC (cromosoma artificial bacteriano), en el cigoto de muchas cepas endogámicas y especializadas de ratones. También ofrecemos inyección de células ES en embriones en estadio de blastocisto y de 8 células de cepas convencionales de ratón y se utiliza un esquema de color de pelaje siempre que sea posible para facilitar la evaluación del quimerismo. Los Servicios de MIJ también han tenido mucho éxito en la creación de modelos animales knockout utilizando tecnologías ZFN (Nucleasa de Dedo de Zinc) y TALEN (Nucleasa Efectora como Activador de Transcripción) directamente en cepas endogámicas y especializadas. El Servicio de Microinyección cuenta actualmente con 5 estaciones completas de microinyección y 3 estaciones quirúrgicas completas. El equipo clave incluye: 3 máquinas de anestesia VetEquip, 3 sistemas láser XYClone, 14 microscopios estereoscópicos, 6 incubadoras de sobremesa, 2 extractores de micropipetas Sutter y 2 Kopf, 2 taladros piezoeléctricos y 3 microforjas.

Producción de Modelos de Ratón:

  • Los modelos de ratón Knockout y knockin se producen inyectando reactivos CRISPR en los cigotos (0,5 dpc) de la cepa huésped deseada. Estos embriones se desarrollan a término después de la transferencia quirúrgica a un ratón hembra pseudopregnante receptor CByB6F1 / J. El ARN guía reconoce el locus genómico por emparejamiento de bases, y la nucleasa Cas9 genera una ruptura de doble hebra (DSB) en el genoma. Si no se utiliza ADN de donante, el DSB se repara mediante el mecanismo propenso a errores de unión final no homóloga (NHEJ), que a menudo lleva una mutación de desplazamiento de marco. Sin embargo, cuando se proporciona y utiliza ADN de donante, la reparación dirigida por homología (HDR) mediará la incorporación de una mutación puntual, la inserción de una etiqueta o un sitio de loxP o el intercambio del gen murino con su ortólogo humano.
  • Los ratones transgénicos se producen microinyectando una construcción génica purificada en el pronúcleo de los cigotos (0,5 dpc) de la cepa huésped deseada. Estos embriones se desarrollan a término después de la transferencia quirúrgica a un ratón hembra pseudopregnante receptor CByB6F1 / J. Las crías resultantes se transfieren al investigador para la identificación de los portadores transgénicos. Estos ratones «fundadores» son criados por el investigador para el análisis de expresión.
  • Los ratones con mutaciones específicas se producen mediante microinyección de células madre embrionarias modificadas genéticamente en embriones de ratón en estadio de blastocisto (3,5 dpc). Después de la transferencia quirúrgica y el desarrollo a término, las quimeras (derivadas tanto del embrión huésped como de las células introducidas) son identificadas por el color de la capa y criadas por el investigador para la transmisión de la línea germinal del linaje de células ES manipuladas.

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