Mikroinjektiopalvelut

Mikroinjektiopalvelu (Mij) koostuu mikroinjektioiden suorittamiseen tarvittavista välineistä, instrumentoinnista ja teknisestä asiantuntemuksesta, joka on olennainen vaihe muuntogeenisen hiirimallin luomisprosessissa. MIJ: n henkilökunta hoitaa hiiren yhdyskunnan hoidon, superovulaation, alkionkorjuun, pronukleaarisen, sytoplasmaisen ja blastokystin injektion ja alkionsiirtoleikkauksen päivittäiset toiminnot. Palvelutarjontaan kuuluu CRISPR-reagenssien mikroinjektio tai DNA-rakenne, mukaan lukien BAC (bacterial artificial chromosome), monien sisäsiittoisten ja erikoisten hiirikantojen tsygoottiin. Tarjoamme myös es-soluruiskutusta sekä blastokystiin että 8-soluvaiheen alkioihin tavanomaisista hiirikannoista ja Turkin värimaailmaa käytetään aina kun se on mahdollista kimeerisyyden arvioinnin helpottamiseksi. MIJ-palvelut ovat myös onnistuneet luomaan tyrmäyseläinmalleja käyttäen ZFN – (Sinkkisormen nukleaasi) ja TALEN – (transkription aktivaattori, kuten Efektorinukleaasi) – teknologioita suoraan sisäsiittoisiin ja erikoisiin kantoihin. Mikroinjektiopalvelussa on tällä hetkellä 5 täydellistä mikroinjektioasemaa ja 3 täydellistä kirurgista asemaa. Avainvarustukseen kuuluu: 3 VetEquip-anestesiakonetta, 3 XYClone-laserjärjestelmää, 14 stereomikroskooppia, 6 pöytähautomoa, 2 Sutter-ja 2 Kopf-mikrohautomoa, 2 Piezo-poraa ja 3 mikrof-mikrokonetta.

Hiirimallin Tuotanto:

  • Knockout sekä knockin hiirimallit valmistetaan ruiskuttamalla CRISPR-reagensseja halutun isäntäkannan tsygootteihin (0,5 dpc). Nämä alkiot kehittyvät termin jälkeen kirurgisen siirron vastaanottaja CByB6F1 / j pseudopregnant naarashiiri. Opas-RNA tunnistaa genomisen lokuksen emäsparin avulla, ja Cas9-nukleaasi synnyttää genomiin kaksoisjuosteen katkeamisen (DSB). Jos luovuttaja-DNA: ta ei käytetä, DSB: n korjaa virhealtis nonhomological end Jointing (NHEJ) – mekanismi, johon usein liittyy kehyksensiirtomutaatio. Kuitenkin, kun luovuttaja DNA annetaan ja käytetään, homology directed repair (HDR) välittää sisällyttäminen pisteen mutaatio, lisääminen tag tai loxP sivuston tai vaihtamalla hiiren geenin sen ihmisen ortolog.
  • siirtogeeniset hiiret tuotetaan mikroinjektoimalla puhdistettu geenirakenne halutun isäntäkannan tsygoottien (0,5 dpc) pronukleukseen. Nämä alkiot kehittyvät termin jälkeen kirurgisen siirron vastaanottaja CByB6F1 / j pseudopregnant naarashiiri. Syntyneet poikaset siirretään tutkijalle transgeenin kantajien tunnistamista varten. Nämä” perustajahiiret ” jalostetaan sitten tutkijan toimesta ilmaisuanalyysiä varten.
  • Kohdemutanttihiiret tuotetaan mikroinjektoimalla geneettisesti muunneltuja alkion kantasoluja blastokystavaiheen hiiren alkioiksi (3,5 dpc). Kirurgisen siirron ja termin kehittymisen jälkeen chimerat (jotka ovat peräisin sekä isäntäalkiosta että tuoduista soluista) tunnistetaan turkin värin perusteella, ja tutkija kasvattaa ne manipuloidun ES-solulinjan alkiolinjan siirtämistä varten.

Vastaa

Sähköpostiosoitettasi ei julkaista.