Services de microinjection

Le Service de microinjection (MIJ) comprend les installations, l’instrumentation et l’expertise technique nécessaires à la réalisation de la microinjection, une étape essentielle dans le processus de création d’un modèle de souris génétiquement modifié. Le personnel du MIJ s’occupe quotidiennement de la gestion des colonies de souris, de la superovulation, de la récolte d’embryons, de l’injection pronucléaire, cytoplasmique et de blastocystes et de la chirurgie de transfert d’embryons. Les offres de services comprennent la microinjection de réactifs CRISPR ou d’une construction d’ADN, y compris BAC (chromosome artificiel bactérien), dans le zygote de nombreuses souches consanguines et spécialisées de souris. Nous proposons également l’injection de cellules ES dans des embryons de blastocystes et de stade à 8 cellules de souches de souris conventionnelles et un schéma de couleurs de pelage est utilisé dans la mesure du possible pour faciliter l’évaluation du chimérisme. Les services MIJ ont également réussi à créer des modèles animaux knockout en utilisant les technologies ZFN (Nucléase à doigts de zinc) et TALEN (Activateur de transcription Comme Nucléase effectrice) directement sur des souches consanguines et spécialisées. Le Service de microinjection compte actuellement 5 stations de microinjection complètes et 3 stations chirurgicales complètes. L’équipement clé comprend: 3 appareils d’anesthésie VetEquip, 3 systèmes laser XYClone, 14 stéréomicroscopes, 6 incubateurs de paillasse, 2 extracteurs de micropipettes Sutter et 2 Kopf, 2 perceuses piézo-électriques et 3 microforges.

Production de Modèles de souris:

  • Des modèles de souris Knockin et knockin sont produits en injectant des réactifs CRISPR dans les zygotes (0,5 dpc) de la souche hôte souhaitée. Ces embryons se développent à terme après un transfert chirurgical chez une souris femelle pseudopregnante CByB6F1/J receveuse. L’ARN guide reconnaît le locus génomique par appariement de bases, et la nucléase Cas9 génère une rupture à double brin (DSB) dans le génome. Si aucun ADN de donneur n’est utilisé, le DSB est réparé par le mécanisme de jonction d’extrémité non-homologue (NHEJ), sujet aux erreurs, qui porte souvent une mutation à décalage de cadre. Cependant, lorsque l’ADN donneur est fourni et utilisé, la réparation dirigée par homologie (HDR) médiera l’incorporation d’une mutation ponctuelle, l’insertion d’une étiquette ou d’un site loxP ou l’échange du gène murin avec son orthologue humain.
  • Les souris transgéniques sont produites par microinjection d’une construction génique purifiée dans le pronucléus des zygotes (0,5 dpc) de la souche hôte souhaitée. Ces embryons se développent à terme après un transfert chirurgical chez une souris femelle pseudopregnante CByB6F1/J receveuse. Les chiots qui en résultent sont transférés à l’enquêteur pour l’identification des porteurs de transgènes. Ces souris « fondatrices » sont ensuite élevées par l’investigateur pour une analyse d’expression.
  • Les souris mutantes ciblées sont produites par microinjection de cellules souches embryonnaires génétiquement modifiées dans des embryons de souris au stade blastocyste (3,5 dpc). Après le transfert chirurgical et le développement à terme, les chimères (dérivées à la fois de l’embryon hôte et des cellules introduites) sont identifiées par la couleur du pelage et élevées par l’investigateur pour la transmission par lignée germinale de la lignée cellulaire ES manipulée.

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