Mikroinjekciós szolgáltatások

a mikroinjekciós (mij) szolgáltatás a mikroinjekció végrehajtásához szükséges létesítményekből, műszerekből és műszaki szakértelemből áll, amely elengedhetetlen lépés a géntechnológiával módosított egérmodell létrehozásának folyamatában. Az mij munkatársai napi tevékenységet végeznek az egér kolónia kezelésében, a szuperovulációban, az embriógyűjtésben, a pronukleáris, a citoplazmatikus és a blasztociszta injekcióban és az embriótranszfer műtétben. A szolgáltatások közé tartozik a CRISPR reagensek mikroinjekciója vagy egy DNS-konstrukció, beleértve a BAC-t (bakteriális mesterséges kromoszóma) számos beltenyésztett és speciális egér törzs zigótájába. Kínálunk ES sejtinjekciót mind a hagyományos egér törzsek blasztocisztába, mind a 8 sejtes stádiumú embrióiba, és amikor csak lehetséges, a kabát színsémáját használjuk a kimérizmus értékelésének megkönnyítésére. A mij szolgáltatások szintén nagyon sikeresek voltak a knockout állatmodellek létrehozásában ZFN (cink ujj nukleáz) és TALEN (transzkripciós aktivátor, mint effektor nukleáz) technológiák segítségével közvetlenül beltenyésztett és speciális törzseken. A mikroinjekciós szolgálat jelenleg 5 teljes mikroinjekciós állomással és 3 teljes sebészeti állomással rendelkezik. A legfontosabb berendezések közé tartozik: 3 VetEquip érzéstelenítő gép, 3 XYClone lézerrendszer, 14 sztereomikroszkóp, 6 asztali inkubátor, 2 Sutter és 2 Kopf mikropipettahúzó, 2 Piezo fúró és 3 mikrovágó.

Egér Modell Gyártása:

  • Knockout valamint knockin egér modelleket úgy állítanak elő, hogy CRISPR reagenseket injektálnak a kívánt gazdatörzs zigótáiba (0,5 dpc). Ezek az embriók kifejlődnek a műtéti transzfer után egy recipiens CByB6F1 / J álterhes nőstény egérbe. A vezető RNS bázispárosítással ismeri fel a genomi lokuszt, a Cas9 nukleáz pedig kettős szálú törést (DSB) generál a genomban. Ha nem használnak donor DNS-t, akkor a DSB-t a nemhomológ végcsatlakozás hibára hajlamos mechanizmusa javítja (NHEJ), amely gyakran hordozza a kereteltolódás mutáció. Amikor azonban donor DNS-t biztosítanak és használnak, a homology directed repair (HDR) közvetíti egy pontmutáció beépülését, egy tag vagy egy loxP hely beillesztését vagy az egér gén cseréjét az emberi ortológussal.
  • a transzgenikus egereket úgy állítják elő, hogy egy tisztított génkonstrukciót mikroinjektálnak a kívánt gazdatörzs zigótáinak (0,5 dpc) pronucleusába. Ezek az embriók kifejlődnek a műtéti transzfer után egy recipiens CByB6F1 / J álterhes nőstény egérbe. A kapott kölyköket átadják a vizsgálónak a transzgén-hordozók azonosítására. Ezeket az” alapító ” egereket ezután a kutató tenyészti expressziós elemzés céljából.
  • a célzott mutáns egereket genetikailag módosított embrionális őssejtek mikroinjekciójával állítják elő blasztociszta stádiumú egér embriók (3,5 dpc). A műtéti transzfer és a term-be történő fejlődés után a kimérákat (mind a gazdaembrióból, mind a bevezetett sejtekből származnak) a szőrzet színe alapján azonosítják, és a vizsgáló a manipulált ES sejtvonal csíravonalas átvitelére tenyészti.

Vélemény, hozzászólás?

Az e-mail-címet nem tesszük közzé.