マイクロインジェクションサービス

マイクロインジェクション(MIJ)サービスは、遺伝子改変マウスモデルを作成するプロセスの不可欠なステップである MIJスタッフは、マウスコロニー管理、過排卵、はい収穫、前核、細胞質、胚盤胞注入およびはい移植手術の毎日の活動を行っています。 サービス提供には、CRISPR試薬またはBAC(細菌人工染色体)を含むDNA構築物の、多くの近交系および特殊系統のマウスの接合体へのマイクロインジェクションが また、従来のマウス株の胚盤胞および8細胞期胚の両方へのES細胞注入を提供し、キメリズムの評価を容易にするために可能な限りコートカラースキーム MIJサービスは、zfn(Zinc Finger Nuclease)とTALEN(Transcription Activator Like Effector Nuclease)技術を近交系および特殊株に直接使用して、ノックアウト動物モデルを作成することにも非常に成功しています。 マイクロインジェクションサービスには現在、5つの完全なマイクロインジェクションステーションと3つの完全な外科ステーションがあります。 主装置は下記のものを含んでいる:3台のVetEquipの麻酔機械、3台のXYCloneレーザーシステム、14台のstereomicroscopes、6台のbenchtopの定温器、2台のSutterおよび2台のKopf micropipetteの引き手、2台のPiezoドリル

マウスモデル製作:

  • Knockoutおよびknockinマウスモデルは、所望の宿主株の接合体(0.5dpc)にCRISPR試薬を注入することによって作製される。 これらの胚は、レシピエントCbyb6F1/J偽妊娠雌マウスへの外科的移植後の用語に開発しています。 ガイドRNAは塩基対形成によってゲノム遺伝子座を認識し、Cas9ヌクレアーゼはゲノム内に二重鎖切断(DSB)を生成する。 ドナー DNAが使用されていない場合、DSBは、多くの場合、フレームシフト変異を運ぶnonhomologous end joining(NHEJ)のエラーが発生しやすいメカニズムによって修復されます。 しかし、ドナー DNAが提供され、使用される場合、相同性指向修復(HDR)は、点突然変異の取り込み、タグまたはloxP部位の挿入、またはマウス遺伝子のヒトオルソログとの交換を媒介するであろう。
  • トランスジェニックマウスは、所望の宿主株の接合体(0.5dpc)の前核に精製された遺伝子構築物をマイクロインジェクションすることによって産生さ これらの胚は、レシピエントCbyb6F1/J偽妊娠雌マウスへの外科的移植後の用語に開発しています。 得られた仔は、導入遺伝子キャリアの同定のために研究者に移される。 これらの「創設者」マウスは、発現分析のために研究者によって飼育される。
  • 標的変異マウスは、胚盤胞ステージマウス胚(3.5dpc)に遺伝子改変胚性幹(ES)細胞をマイクロインジェクションすることによって生成されます。 外科的移動およびtermへの発達の後、キメラ(宿主胚および導入された細胞の両方に由来する)は、コートの色によって同定され、操作されたES細胞系統の生殖系列伝達のための研究者によって繁殖される。

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