Mikroinjektionsdienste

Der Mikroinjektionsdienst (MIJ) umfasst die Einrichtungen, Instrumente und das technische Fachwissen, die für die Durchführung der Mikroinjektion erforderlich sind, ein wesentlicher Schritt bei der Erstellung eines genetisch veränderten Mausmodells. Das MIJ-Personal führt die täglichen Aktivitäten des Mauskoloniemanagements, der Superovulation, der Embryonenernte, der vorkernigen, zytoplasmatischen und Blastozysteninjektion und der Embryotransferchirurgie durch. Das Serviceangebot umfasst die Mikroinjektion von CRISPR-Reagenzien oder eines DNA-Konstrukts, einschließlich BAC (bacterial Artificial Chromosome), in die Zygote vieler Inzucht- und Spezialstämme von Mäusen. Wir bieten auch ES-Zellinjektion in Blastozysten- und 8-Zell-Embryonen herkömmlicher Mausstämme an, und das Fellfarbschema wird nach Möglichkeit verwendet, um die Beurteilung des Chimärismus zu erleichtern. Das MIJ Services war auch sehr erfolgreich bei der Erstellung von Knockout-Tiermodellen unter Verwendung von ZFN- (Zinkfinger-Nuklease) und TALEN-Technologien (Transkriptionsaktivator wie Effektornuklease) direkt an Inzucht- und Spezialstämmen. Der Mikroinjektionsdienst verfügt derzeit über 5 komplette Mikroinjektionsstationen und 3 komplette chirurgische Stationen. Die Hauptausrüstung umfasst: 3 VetEquip-Anästhesiegeräte, 3 XYClone-Lasersysteme, 14 Stereomikroskope, 6 Tischinkubatoren, 2 Sutter- und 2 Kopf-Mikropipettenzieher, 2 Piezo-Bohrer und 3 Mikroschmieden.

Maus Modell Produktion:

  • Knockout- sowie Knockin-Mausmodelle werden durch Injektion von CRISPR-Reagenzien in die Zygoten (0,5 dpc) des gewünschten Wirtsstamms hergestellt. Diese Embryonen entwickeln sich nach chirurgischem Transfer in eine pseudopregnante weibliche Maus des Empfängers CByB6F1 / J. Die Führungs-RNA erkennt den genomischen Locus durch Basenpaarung, und die Cas9-Nuklease erzeugt einen Doppelstrangbruch (DSB) im Genom. Wenn keine Donor-DNA verwendet wird, wird das DSB durch den fehleranfälligen Mechanismus der nichthomologen Endverbindung (NHEJ) repariert, der häufig eine Frameshift-Mutation trägt. Wenn jedoch Donor-DNA bereitgestellt und verwendet wird, vermittelt die homologiegesteuerte Reparatur (HDR) den Einbau einer Punktmutation, die Insertion eines Tags oder einer loxP-Stelle oder den Austausch des murinen Gens mit seinem humanen Ortholog.
  • Transgene Mäuse werden durch Mikroinjektion eines gereinigten Genkonstrukts in den Vorkern von Zygoten (0,5 dpc) des gewünschten Wirtsstamms hergestellt. Diese Embryonen entwickeln sich nach chirurgischem Transfer in eine pseudopregnante weibliche Maus des Empfängers CByB6F1 / J. Die resultierenden Welpen werden zur Identifizierung von Transgenträgern an den Prüfer übertragen. Diese „Gründer“ -Mäuse werden dann vom Forscher zur Expressionsanalyse gezüchtet.
  • Zielgerichtete mutierte Mäuse werden durch Mikroinjektion gentechnisch veränderter embryonaler Stammzellen (ES) in Mausembryonen im Blastozystenstadium (3,5 dpc) hergestellt. Nach dem chirurgischen Transfer und der Entwicklung zum Term werden Chimären (abgeleitet sowohl vom Wirtsembryo als auch von den eingeführten Zellen) anhand der Fellfarbe identifiziert und vom Prüfer für die Keimbahnübertragung der manipulierten ES-Zelllinie gezüchtet.

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