Microinjectiediensten

de Microinjectiedienst (MIJ) bestaat uit de faciliteiten, instrumenten en technische expertise die nodig zijn voor het uitvoeren van microinjecties, een essentiële stap in het proces om een genetisch gemodificeerd muismodel te creëren. Het personeel van MIJ voert de dagelijkse activiteit uit van muiskoloniebeheer, superovulatie, embryooogst, pronucleaire, cytoplasmatische en blastocyste injectie en embryotransferchirurgie. De dienstaanbiedingen omvatten microinjectie van CRISPR reagentia of een DNA construct, met inbegrip van BAC (bacterieel kunstmatig chromosoom), in de zygote van vele inteelt en speciale stammen van muizen. We bieden ook ES cel injectie in zowel blastocyst en 8-cel Stadium embryo ‘ s van conventionele muizenstammen en vacht kleurenschema wordt gebruikt waar mogelijk om de beoordeling van chimerisme te vergemakkelijken. De MIJ Services is ook zeer succesvol geweest in het creëren van knockout diermodellen met behulp van ZFN (zink vinger Nuclease) en TALEN (transcriptie Activator Like Effector Nuclease) technologieën direct op inteelt en speciale stammen. De Microinjectiedienst heeft momenteel 5 Complete microinjectiestations en 3 complete chirurgische stations. De belangrijkste uitrusting omvat: 3 VetEquip anesthesiemachines, 3 xyclone lasersystemen, 14 stereomicroscopen, 6 benchtop incubators, 2 Sutter en 2 Kopf micropipette Trekkers, 2 Piezo boren en 3 microforges.

Productie Van Muismodellen: Knockout – en knockin-muismodellen worden geproduceerd door CRISPR-reagentia in de zygoten (0,5 dpc) van de gewenste gastheerstam te injecteren. Deze embryo ‘ s ontwikkelen zich na chirurgische overdracht in een ontvanger CByB6F1/J pseudopregnante vrouwelijke muis. Gidsrna erkent de genomic plaats door Basis in paren rangschikken, en Cas9 nuclease produceert een dubbele bundelbreuk (DSB) in het genoom. Als er geen donor-DNA wordt gebruikt, wordt DSB hersteld door het foutgevoelige mechanisme van niet-homologe eindverbinding (NHEJ) dat vaak een frameshift-mutatie draagt. Echter, wanneer donor DNA wordt geleverd en gebruikt, homology directed repair (HDR) zal de integratie van een punt mutatie, insertie van een tag of een loxP site of swapping van het muriene gen met zijn menselijke ortholog bemiddelen.

  • transgene muizen worden geproduceerd door het micro-injecteren van een gezuiverde genconstructie in de pronucleus van zygoten (0,5 dpc) van de gewenste gastheerstam. Deze embryo ‘ s ontwikkelen zich na chirurgische overdracht in een ontvanger CByB6F1/J pseudopregnante vrouwelijke muis. De resulterende pups worden overgebracht naar de onderzoeker voor de identificatie van transgen-dragers. Deze “stichter” muizen worden vervolgens gefokt door de onderzoeker voor expressie analyse.
  • gerichte-gemuteerde muizen worden geproduceerd door genetisch gemodificeerde embryonale stamcellen (ES) in blastocyst-Stadium muizenembryo ‘ s (3.5 dpc) te micro-injecteren. Na chirurgische overdracht en ontwikkeling op termijn, worden chimeras (afgeleid van zowel het gastheerembryo als de geïntroduceerde cellen) geïdentificeerd door vachtkleur en gefokt door de onderzoeker voor kiemlijntransmissie van de gemanipuleerde es-cellijn.

Geef een antwoord

Het e-mailadres wordt niet gepubliceerd.