Usługi mikroiniekcji

usługa mikroiniekcji (MIJ) składa się z urządzeń, oprzyrządowania i wiedzy technicznej niezbędnej do przeprowadzenia mikroiniekcji, niezbędnego etapu procesu tworzenia genetycznie zmodyfikowanego modelu myszy. Personel MIJ wykonuje codzienną aktywność zarządzania kolonią myszy, superowulacji, zbioru zarodków, pronuclear, cytoplasmic i blastocyst injection i operacji transferu zarodków. Oferta usług obejmuje mikroiniekcję odczynników CRISPR lub konstruktu DNA, w tym BAC (bakteryjny sztuczny chromosom), do zygoty wielu wsobnych i specjalnych szczepów myszy. Oferujemy również wstrzyknięcie komórek ES zarówno do zarodków blastocystowych, jak i 8-komórkowych konwencjonalnych szczepów myszy, a kolor sierści jest stosowany w miarę możliwości w celu ułatwienia oceny chimeryzmu. Usługi MIJ odniosły również duży sukces w tworzeniu nokautujących modeli zwierzęcych przy użyciu technologii ZFN (Zinc Finger Nuclease) i TALEN (Transcription Activator Like Effector Nuclease) bezpośrednio na szczepy wsobne i specjalne. Usługa Mikroinjekcji posiada obecnie 5 kompletnych stacji mikroinjekcji i 3 kompletne stacje chirurgiczne. Kluczowe wyposażenie obejmuje: 3 urządzenia do anestezji VetEquip, 3 systemy laserowe XYClone, 14 stereomikroskopów, 6 inkubatorów stołowych, 2 Ściągacze Mikropipetowe Sutter i 2 Kopf, 2 wiertła piezoelektryczne i 3 mikrofofory.

Produkcja Modeli Myszków:

  • modele Knockout oraz knockin mouse są wytwarzane przez wstrzykiwanie reagentów CRISPR do zygot (0,5 dpc) pożądanego szczepu gospodarza. Zarodki te rozwijają się do terminu po chirurgicznym przeniesieniu do biorcy cbyb6f1 / J pseudopregnant samicy myszy. Przewodnik RNA rozpoznaje genomowe locus przez parowanie zasad, i Cas9 nuclease generuje double strand break (DSB) w genomie. Jeśli dna dawcy nie jest używany, DSB jest naprawiany przez mechanizm podatny na błędy nonhomologous end joining (NHEJ), który często niesie mutację frameshift. Jednakże, gdy dna dawcy jest dostarczany i używany, homology directed repair (HDR) będzie pośredniczyć inkorporacji mutacji punktowej, wstawiania znacznika lub miejsca loxP lub zamiany mysi gen z jego ludzkim ortologiem.
  • myszy transgeniczne są wytwarzane przez mikroinjekcję oczyszczonego genu do pronukleusa zygot (0,5 dpc) pożądanego szczepu gospodarza. Zarodki te rozwijają się do terminu po chirurgicznym przeniesieniu do biorcy cbyb6f1 / J pseudopregnant samicy myszy. Uzyskane szczenięta są przekazywane badaczowi w celu identyfikacji transpłciowców. Te” założycielskie ” myszy są następnie hodowane przez badacza do analizy ekspresji.
  • ukierunkowane zmutowane myszy są wytwarzane przez mikroinjekcję genetycznie zmodyfikowanych zarodkowych komórek macierzystych do zarodków myszy w stadium blastocysty (3,5 dpc). Po chirurgicznym przeniesieniu i rozwoju do terminu, Chimery (pochodzące zarówno z zarodka gospodarza, jak i wprowadzonych komórek) są identyfikowane przez kolor sierści i hodowane przez badacza w celu transmisji linii zarodkowej manipulowanej linii komórek ES.

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.