Servicii de microinjecție

serviciul de microinjecție (MIJ) este alcătuit din facilitățile, instrumentele și expertiza tehnică necesare pentru a efectua microinjecția, un pas esențial în procesul de creare a unui model de șoarece modificat genetic. Personalul MIJ desfășoară activitatea zilnică de gestionare a coloniilor de șoarece, superovulație, recoltare de embrioni, injecție pronucleară, citoplasmatică și blastocistă și chirurgie de transfer de embrioni. Ofertele de servicii includ microinjecția reactivilor CRISPR sau a unui construct ADN, inclusiv BAC (cromozom artificial bacterian), în zigotul multor tulpini consangvinizate și de specialitate ale șoarecilor. De asemenea, oferim injecție de celule ES atât în blastocist, cât și în embrioni cu 8 celule de tulpini convenționale de șoarece, iar schema de culori a stratului este utilizată ori de câte ori este posibil pentru a facilita evaluarea chimerismului. Serviciile MIJ au avut, de asemenea, un mare succes în crearea modelelor animale knockout folosind tehnologiile ZFN (zinc finger nuclează) și TALEN (activator de transcriere ca nuclează efectoare) direct pe tulpini consangvinizate și de specialitate. Serviciul de microinjecție are în prezent 5 stații complete de microinjecție și 3 stații chirurgicale complete. Echipamentul cheie Include: 3 mașini de anestezie VetEquip, 3 sisteme laser XYClone, 14 Stereomicroscoape, 6 incubatoare benchtop, 2 aspiratoare de micropipetă Sutter și 2 Kopf, 2 burghie Piezo și 3 microforge.

Producția De Modele De Șoarece:

  • modelele Knockout și Knockin mouse sunt produse prin injectarea reactivilor CRISPR în zigoții (0,5 dpc) ai tulpinii gazdă dorite. Acești embrioni se dezvoltă până la termen după transferul chirurgical într-un șoarece femelă pseudopregnant CByB6F1/J. ARN-ul ghid recunoaște locusul genomic prin împerecherea bazelor, iar nucleaza Cas9 generează o pauză dublă de catenă (DSB) în genom. Dacă nu se utilizează ADN donator, DSB este reparat de mecanismul predispus la erori de îmbinare finală nonhomologă (NHEJ) care poartă adesea o mutație de schimbare a cadrelor. Cu toate acestea, atunci când ADN-ul donator este furnizat și utilizat, homology directed repair (HDR) va Media încorporarea unei mutații punctuale, inserarea unei etichete sau a unui situs loxP sau schimbarea genei murine cu ortologul său uman.
  • șoarecii transgenici sunt produși prin microinjectarea unei construcții genetice purificate în pronucleus de zigoți (0,5 dpc) a tulpinii gazdă dorite. Acești embrioni se dezvoltă până la termen după transferul chirurgical într-un șoarece femelă pseudopregnant CByB6F1/J. Puii rezultați sunt transferați investigatorului pentru identificarea transportatorilor transgeni. Acești șoareci” fondatori ” sunt apoi crescuți de investigator pentru analiza expresiei.
  • șoarecii mutanți vizați sunt produși prin microinjectarea celulelor stem embrionare modificate genetic în embrioni de șoarece în stadiu de blastocist (3,5 dpc). După transferul chirurgical și dezvoltarea la termen, himerele (derivate atât din embrionul gazdă, cât și din celulele introduse) sunt identificate prin culoarea stratului și crescute de investigator pentru transmiterea liniei germinale a liniei celulare es manipulate.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată.